動物尿液中沙丁胺醇殘留檢測試紙條的研制

韓京朋，吳小平，邱檢萍，王照鵬，李向梅，蘇麗芳，許舒婷，李詩焱，袁淑娟

（北京維德維康生物技術(shù)有限公司，北京 100095）

摘 要：為了制備可用于檢測動物尿液中沙丁胺醇殘留的試紙條，本研究采用膠體金免疫層析方法。首先將小分子沙丁胺醇進行了改造，并在此基礎(chǔ)上制備了SAL抗原和抗SAL抗體，進而制備得到了膠體金標(biāo)記抗體，然后將其噴涂于膠體金結(jié)合墊，并與樣品墊、NC膜、吸水紙以及塑料底板組裝，得到SAL檢測試紙條。結(jié)果表明，試紙條對豬尿、牛尿、羊尿中SAL的檢測限為3.0 μg/L，檢測時間為5 min，特異性高，重復(fù)性良好，與儀器方法檢測結(jié)果一致，可用于動物尿液中SAL的現(xiàn)場快速檢測和篩選工作。

關(guān)鍵詞：沙丁胺醇；膠體金；試紙條；檢測

Research on salbutamol residue test strip in animal urine

Han Jingpeng1, Wen Kai2, Qiu Jianping1, Wang Zhaopeng1, Su Lifang1, Xu Shuting1 ,Yao Lin1

(1.Beijing WDWK Biotech Co., Ltd, Beijing, 100095;2.Department of Veterinary Pharmacology and Toxicology, College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing, 100193)

Abstract:To prepared test strip that can be used to detect salbutamol residues in animal urine, Colloidal gold immunochromatography method was been adopted .First we transformed the salbutamol molecules, and prepared the antigen and anti-SAL antibody on the molecule basis, and then prepared the colloidal gold-labeled antibody, and then sprayed the labeled antibody on the gold jed pad, at last we assembled SAL test strip with the jed pad, the sample pad, the NC membrane, the water paper and plastic baseboard. The results showed that the detection limit of the strip was 3.0 μg/L for SAL in pig urine, cow urine and sheep urine , respectively, the detection time was about 5 min, high specificity, good reproducibility and the results were consistent with the instrument approach, so the strip can be used for SAL rapid testing in animal urine and screening.  

Key words：Salbutamol；colloidal gold；strip；test

沙丁胺醇（Salbutamol，SAL），化學(xué)名為1-(4-羥基-3-羥甲基苯基)-2-(叔丁氨基)乙醇，是人工合成的水楊醇類β-腎上腺素激動劑（β-興奮劑），能選擇性激動支氣管平滑肌的β2受體，臨床上廣泛用于治療支氣管哮喘[1]。由于具有促進骨骼肌生長，減少脂肪蓄積的作用，因此SAL作為促生長劑被不法分子用在畜禽生產(chǎn)中[2]。

由于β-興奮劑通過食物鏈富集，zui終蓄積于人體，引起頭暈、惡心、手腳震顫甚至心臟驟停等嚴重后果，所以世界各國都先后立法禁止在畜禽生產(chǎn)中使用β-興奮劑作為飼料添加劑[3, 4]。β-興奮劑中，克倫特羅是zui常用的飼料添加劑，國內(nèi)外均已研究出快速有效的檢測方法對其進行監(jiān)測，使得其非法使用受到了較有效的控制，而SAL檢測手段研究相對滯后，因而成為不法分子謀取經(jīng)濟利益的新手段[5-7]。因此，建立快速、簡單、方便、有效的檢測手段是控制SAL非法使用的有效手段。本研究在合成SAL抗原的基礎(chǔ)上，制備抗SAL單克隆抗體，研制出了SAL膠體金免疫層析試紙條，該方法的建立對于保障廣大消費者的切身利益和畜牧業(yè)健康發(fā)展有積極的推動作用。

1  材料和方法

1.1材料與儀器

牛血清白蛋白（BSA）、卵清蛋白（OVA）、SAL、克倫特羅（CL）等β-興奮劑類藥物標(biāo)準品Sigma公司；乙二醇二縮水甘油醚、碳酸氫鈉、碳酸鉀等試劑 北京化工試劑公司；膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜（NC膜）、樣品墊等材料 上海金標(biāo)生物科技有限公司；膠體金溶液、羊抗鼠二抗 自制。

電子天平FA2104、磁力攪拌器90-2 上海良平儀器儀表有限公司；低速離心機L500 湘儀集團； XYZ3000點膜儀 BioDot公司。

1.2 方法

1.2.1 SAL半抗原制備

稱取SAL 10 mg，置于10 mL三角燒瓶中，加入濃度為3 %的碳酸氫鈉水溶液5 mL，充分攪拌使其*溶解，加入乙二醇二縮水甘油醚6.2 µL，室溫攪拌反應(yīng)4 h，然后將得到的混合液真空干燥，即可得到粉末狀SAL半抗原。

1.2.2 SAL-BSA的制備

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