比重大于 4.5 的金屬被稱為重金屬,如鉻(Cr)、鉛(Pb)、鎘(Cd)、砷(As)、汞(Hg)、銅(Cu)等,它們往往在動(dòng)物和植物體內(nèi)不斷積聚,再經(jīng)由食物鏈富集,zui后進(jìn)入人體并在人體內(nèi)與蛋白質(zhì)及酶等發(fā)生強(qiáng)烈的相互作用,使它們失去活性,從而危害人體健康。我國(guó)食品中重金屬超標(biāo)問題也時(shí)有發(fā)生,水產(chǎn)品、海產(chǎn)品、水果、蔬菜以及糧食等均存在重金屬超標(biāo)的現(xiàn)象。
目前,重金屬檢測(cè)已成為食品安全檢測(cè)的一項(xiàng)重要內(nèi)容。傳統(tǒng)的重金屬檢測(cè)方法有很多,例如原子吸收分光光度法(AAS)、液相色譜法(HPLC)、原子熒光分光光度法(AFS)、電感藕合等離子體法(ICP)等。電感藕合等離子體法又分為電感藕合等離子質(zhì)譜法(ICP-MS)和電感藕合等離子原子發(fā)射光譜法(ICP-AES)。經(jīng)過多年的發(fā)展,傳統(tǒng)的重金屬檢測(cè)方法已日趨成熟,例如HPLC 靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好且可同時(shí)測(cè)定多種元素。但該方法檢測(cè)費(fèi)用高,流動(dòng)相消耗大且多數(shù)有毒,并且可供使用的結(jié)合劑有限,給該方法帶來了很多的局限性。這些傳統(tǒng)的重金屬檢測(cè)方法均有各自的優(yōu)點(diǎn),也存在一些難以解決的問題:如有的方法儀器設(shè)備昂貴、專業(yè)技術(shù)要求高、難以應(yīng)用于現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)快速檢測(cè)等。
自從酶聯(lián)免疫法(Enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)被Engvall 等建立以來,廣泛用于食品、醫(yī)學(xué)檢測(cè),近年來許多學(xué)者研究用于重金屬的檢測(cè),與傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)相比,有操作簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)、靈敏度高、適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn),因而 ELISA 法在重金屬的檢測(cè)中得以快速發(fā)展。
隨著酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)在重金屬檢測(cè)上的快速發(fā)展,ELISA 試劑盒的應(yīng)用解決了傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)的一些弊端,現(xiàn)已成為了一種快速、簡(jiǎn)便和可靠的檢測(cè)手段。ELISA 檢測(cè)方法只能在液相環(huán)境中進(jìn)行,即只能檢測(cè)離子態(tài)重金屬,而金屬往往以結(jié)合態(tài)存在于樣品中,因此需要通過前處理使樣品中待測(cè)的金屬離子釋放到液相檢測(cè)環(huán)境中,同時(shí)還可除去干擾因子避免對(duì)后續(xù)檢測(cè)結(jié)果的影響。因此,建立一套快速、、環(huán)保且適用于ELISA 法檢測(cè)重金屬含量的樣品前處理的方法具有重要的意義。目前適用于ELISA 法快速檢測(cè)食品中重金屬含量的樣品前處理方法主要有:濕式消化法、微波消解法、浸提法等。
ELISA法檢測(cè)重金屬常用方法
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間接競(jìng)爭(zhēng)法
間接競(jìng)爭(zhēng)法的原理是待檢測(cè)樣品中的競(jìng)爭(zhēng)物和重金屬*抗原共同競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合單克隆抗體相同表位,通過酶標(biāo)二抗孵育,底物顯色后可通過標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待檢測(cè)樣品中的重金屬離子的濃度。該方法是zui早使用的免疫學(xué)檢測(cè)方法,該方法比較成熟和完善,也是目前應(yīng)用zui多的方法。隨著研究的深入,ELISA 法檢測(cè)重金屬樣品靈敏度已經(jīng)*可以達(dá)到傳統(tǒng)的技術(shù)的水平。
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直接競(jìng)爭(zhēng)法
直接競(jìng)爭(zhēng)法的原理與間接競(jìng)爭(zhēng)法類似,相對(duì)于間接競(jìng)爭(zhēng)法來說,無需加二抗,一方面降低了實(shí)驗(yàn)成本、簡(jiǎn)化了操作步驟;另一方面其檢測(cè)靈敏度高、特異性強(qiáng)。但由于起步相對(duì)較晚,應(yīng)用沒有間接競(jìng)爭(zhēng)法普遍。Liu [38]等采用直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品中Cd2+,IC50值為2.30μg/L,檢測(cè)限為0.2 μg/L,并表現(xiàn)出高特異性,并且結(jié)果與GFAAS法的檢測(cè)結(jié)果的符合率高達(dá)99%,加之其簡(jiǎn)便性和經(jīng)濟(jì)性,*適用于農(nóng)產(chǎn)品中重金屬的檢測(cè)。
傳統(tǒng)重金屬檢測(cè)方法比較成熟,靈敏度高,但需要專業(yè)技術(shù)人員以及儀器設(shè)備較大、較笨重且成本高。ELISA 法檢測(cè)重金屬存在檢測(cè)過程操作簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)、靈敏度高且適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn),是一種具有特異性強(qiáng)和靈敏度高的檢測(cè)方法。隨著研究的深入,ELISA法檢測(cè)重金屬樣品也日臻成熟,靈敏度多已達(dá)到ng至pg級(jí)水平,加之ELISA法檢測(cè)重金屬的方便性,將在很多方面得到更廣泛的應(yīng)用。
【參考文獻(xiàn)】
茍珍瓊,蘭洋,鄭韻,等. ELISA 法快速檢測(cè)食品中重金屬含量的研究進(jìn)展[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè),2017-9-19.
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